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如何操作倒置熒光顯微鏡?

更新時間:2024-09-26      點擊次數(shù):763
  操作倒置熒光顯微鏡是一個涉及多個步驟的精細過程,主要用于觀察細胞、組織等生物樣本的熒光信號。以下是詳細的操作步驟,以及一些關(guān)鍵的注意事項,確保您能夠正確、安全地使用這一高級顯微鏡。
  操作步驟
  1.準(zhǔn)備工作
  清潔工作臺:確保工作臺干凈整潔,避免灰塵和雜物對實驗結(jié)果的影響。
  樣本制備:根據(jù)實驗需求制備好待觀察的樣本,如細胞培養(yǎng)物、組織切片等,并進行適當(dāng)?shù)墓潭ā⑷旧颓鍧崱?/div>
  儀器檢查:將倒置熒光顯微鏡放置在平穩(wěn)的工作臺上,插上電源線,檢查所有部件是否處于正常工作狀態(tài)。
  2.打開電源與預(yù)熱
  打開顯微鏡控制箱的開關(guān),以及電控載物臺和熒光電源供應(yīng)器的電源。
  熒光燈需要一定的時間充電,通常為30~60秒,待充電完成后即可開始使用。
  注意,熒光光源在開/關(guān)之間需要間隔至少30分鐘,以保護燈泡。
  3.安裝樣本
  將樣本放置在顯微鏡的載物臺上,并使用載玻片夾固定,確保樣本穩(wěn)定且不會移動。
  4.調(diào)節(jié)照明與焦距
  使用鏡頭底部的可調(diào)節(jié)照明裝置,調(diào)整熒光顯微鏡的照明強度,確保照明充足但不過強,以免損害樣本。
  使用顯微鏡底部的焦點旋鈕調(diào)整樣本的焦距,直到樣本在視野中達到最清晰的觀察狀態(tài)。
  5.選擇濾光片
  根據(jù)實驗中所用熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長,選擇合適的濾光片。
  將激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片分別安裝到顯微鏡中,并確保它們正確對齊且緊固。
  6.觀察與記錄
  通過目鏡觀察樣本的熒光信號,可以使用低倍鏡先觀察樣本的整體形態(tài),再根據(jù)需要轉(zhuǎn)至高倍鏡觀察細節(jié)。
  如果需要,可以使用顯微鏡附帶的拍照功能,記錄樣本的熒光圖像。
  拍攝后,可以將圖像導(dǎo)入圖像分析軟件進行進一步的處理和分析。
  7.關(guān)機與清潔
  觀察結(jié)束后,先關(guān)閉熒光濾光器和激發(fā)濾光片。
  按照正常關(guān)機程序關(guān)閉電腦和Cooled CCD電源開關(guān)。
  關(guān)上熒光電源供應(yīng)器和顯微鏡控制箱的電源。
  取下樣本,清潔載物臺和鏡頭,蓋上防塵罩,并做好使用記錄。
  注意事項
  避免長時間暴露:長時間暴露在熒光光源下可能對眼睛造成傷害,因此應(yīng)盡量避免。
  熒光強度調(diào)節(jié):調(diào)節(jié)熒光強度時,應(yīng)逐漸增加強度,避免突然增加導(dǎo)致熒光信號飽和。
  樣本保濕:在觀察過程中,應(yīng)注意樣本的保濕,避免樣本干燥。
  相機設(shè)置:使用拍照功能時,應(yīng)注意相機的設(shè)置,以獲得最佳的圖像質(zhì)量。
  圖像分析:在圖像分析時,應(yīng)選擇合適的分析方法和參數(shù),以獲得準(zhǔn)確的分析結(jié)果。
  安全操作:在操作過程中,應(yīng)避免直接接觸樣本和顯微鏡的物體表面,以防污染或損壞。
  通過遵循上述操作步驟和注意事項,您可以正確地操作倒置熒光顯微鏡,獲得準(zhǔn)確、清晰的觀察結(jié)果。
 

 

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